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Metter Toledo AL204电子天平（上海速展计量仪器有限公司）。超纯水（Milli-Q超纯水纯化系统自制）

声明：本文所用图片、文字来源《中国医院药学杂志》，版权归原作者所有。莲心碱（中国食品药品鉴定研究院，批号111696-201703）。精密称取BTCI粉末适量，用Tris-HCl缓冲液（0.1 moLL-1、pH 8.0）制备成310-3 moLL-1的溶液。以莲心碱为阳性对照，考察UPLC-DAD-BCD方法用于BChE抑制剂筛选的可行性。已经上市用于治疗AD的药物大多都是生物碱类成分，吴茱萸、钩藤、苦参和山豆根中都富含生物碱，可用BChE抑制剂的筛选。

近年来，研究者致力于从天然产物中寻找毒副作用小的胆碱酯酶抑制剂，已发现的一些活性成分有生物碱类、黄酮类、香豆素和萜类等，其中以生物碱为主。为了快速筛选复杂基质中的活性物质，各种在线分析方法已经被建立并被应用，如：HPLC-UV-DPPH用于地黄中的抗氧化剂的筛选和活性评价，HPLC-UV-AChE方法可快速检测银杏提取物于中的AChE抑制剂，HPLC-BCD方法用于检测绿茶中的-葡萄糖苷酶抑制剂等。结果：利用生物信息学分析，CMCC44841基因组大小为5.057285Mb，GC含量为50.6%，编码区基因5173个。

通过对食源性微生物基因组进行测序、组装，能够获得90%以上的细菌DNA信息，包括种属、耐药基因、毒力因子、转移元件等信息，可对多个细菌间的基因组信息进行比对分析，在细菌鉴定、耐药机制和溯源等研究中发挥重要的作用。相关链接：大肠埃希氏菌，毒素，聚合酶，标准物质声明：本文所用图片、文字来源《食品科学》，版权归原作者所有。组织3家实验室进行协同标定和验证。美国国立卫生研究院已将EAEC归为B类生物恐怖病原体。

Thermo1389生物安全柜、205050GC恒温培养箱、冷冻离心机、NanoDrop2000微量核酸蛋白测定仪、Qubit荧光定量测定仪美国Thermo公司。国家标准GB4789.6-2016规定对生化反应符合大肠埃希氏菌特征的菌落进行集聚热稳定性毒素A基因（enteroag gregative heat-stable enter otoxin A,astA）、集聚黏附菌毛调节基因（aggregative adhesive fimbriaere gulator,aggR）、肠定植因子基因（proteininvolve dinintestinal colonization,pic）三个特征性基因的PCR鉴定，每次PCR反应需要使用EAEC标准菌株及其gDNA作为阳性对照，以保证结果的准确性。

C1000PCR仪、紫外凝胶成像系统美国伯乐公司。自21世纪初，基因测序技术取得突破性进展，基因测序获得的数据量、测序速度和费用都得到大幅度改观。采用冷冻干燥技术制备含量为103CFU/样品的菌球和含量为20ng/样品的gDNA小球。本研究针对目前检验领域需求，利用高通量测序技术对肠道集聚性大肠埃希氏菌CMCC44841进行全基因组测序，研制基因组信息背景清晰、稳定性良好的即用型肠道集聚性大肠埃希氏菌菌体和gDNA两种标准物质，不仅能够应用于食品检测机构的质量控制和人员考核，而且可为我国食品安全检测水平进一步提高、及时发现问题提供有力的技术支撑。

结论：本研究所制备的肠道集聚性大肠埃希氏菌菌体及gDNA标准物质所用菌株来源于我国国内分离菌株，且具有明确的全基因组序列信息，均匀性和稳定性均符合要求，适用性良好，能够满足食品检测实验室的质量控制和能力验证的需求。种属鉴定结果为大肠埃希氏菌（Escherichiacoli），血清预测结果为O127:H21，MLST为ST40型，携带除aggR、astA、pic之外其他相关的毒力基因。细菌基因组DNA提取试剂盒（DP302）天根生化科技有限公司。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。

经3家实验室协同标定，菌体标准物质样品含量均为103CFU/样品。Autoflex飞行质谱德国Bruker公司。

对CMCC44841进行astA、aggR、pic特征性基因PCR确认。菌体标准物质均匀性检验结果F=1.59，符合标准物质的要求。

PCR扩增出astA、aggR、pic片段大小分别为102bp、400bp和1111bp。使用5种不同基质的即食食品样本，按照国标法检验标准物质的适用性。FORMA恒温摇床西班牙IUL公司经过多年的教学实践发现，该实验存在以下问题，需要逐一解决。一、实验方案的选择与原理化学反应速率反映的是单位时间内反应物的浓度变化值，它取决于反应物的性质、浓度，反应温度及催化剂等因素。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。

针对化学反应速率实验中存在的一些问题，譬如试剂易变质，产生废液多，体积量取误差大等情况，选择两种体系进行实验探索。化学反应速率与化学平衡实验是高等院校最常开设的无机实验之一，该实验内容经典、操作基本、所占学时适宜，在我校理工科专业中被广泛采用。

每次只改变混合溶液中的反应物之一Fe Cl3或KI的浓度，保持Na2S2O3的起始浓度相同，即每组溶液到蓝色出现时的c(S2O32-）相同，准确记录溶液从反应开始到溶液出现蓝色所用的时间t，则Fe Cl3与KI的反应速率可表示为：进而可计算出该反应的反应级数、反应速率常数和活化能。由两个反应式的计量关系可以看出，Fe Cl3与Na2S2O3为1∶1的计量关系，即：当溶液呈现蓝色时S2O32-已全部耗尽，所以c(S2O32-）即S2O32-的起始浓度。

针对以上问题，总结前人经验，教学团队选择在常温下以比较稳定的K2S2O8和Fe Cl3溶液为氧化剂，分别与其他试剂组成两种体系进行实验效果对比，以期找出更合适的实验体系。当保持c(I-）不变时，Fe Cl3的反应级数为：当保持c(Fe3+）不变时，KI的反应级数为：从而反应速率常数为：声明：本文所用图片、文字来源《大学教育》，版权归原作者所有。

同时，在化学反应速率实验中试剂用量较大，产生含碘废液多，不符合实验室绿色化要求，需要对实验体系作进一步改进并力求减少试剂用量。式（2）表示的是该反应在开始一段时间内的平均反应速率，可近似看作该反应的起始速率。在实验室高负荷运转状态下，准备实验时极易出现不协调状况并会造成试剂的浪费。更换成（NH4)2S2O8体系后实验成本得到降低，但该试剂配成溶液后在常温下分解比较严重，浓度在0.20molL-1时只能保存2～3天，为保障实验效果经常需要现用现配。

而对于Fe Cl3与KI的反应方程式可表示为：该反应的反应速率与反应物浓度的关系为：式（2）中：c(Fe3+）为Fe3+在t时间内的浓度改变值。其三，实验过程中以玻璃棒搅拌溶液，玻璃棒与烧杯壁会发生持续碰撞，致使烧杯磨损严重。

为测定在一段时间t内的v(Fe3+），在将KI与Fe Cl3溶液相混合的同时，体系中加入了一定体积已知浓度的Na2S2O3和淀粉溶液，这样在反应（1）进行的同时，体系中还进行着如下反应：该反应的反应速率远远大于反应（1），当反应（1）中生成I3-时会立即被S2O32-消耗掉，转而生成无色的S4O62-与I-。相关链接：化学反应，氧化剂，溶液。

研究发现，温度与催化剂对反应速率影响极大，实验过程中须严格控制催化剂加入量，恒定实验温度至高于或低于室温10℃左右即可。推荐了一种实验效果良好的反应体系，结果表明，该体系反应速率常数的相对平均偏差仅为1.45%，活化能的相对偏差仅为1.52%，且试剂消耗量低，产生含碘废液少，符合实验室绿色化要求。

其二，溶液的量取通常采用量筒操作，某些学生为赶速度会忽略规范操作，导致溶液体积误差较大，使得实验数据测量不准确。c(Fe3+）、c(I-）为两种离子的起始浓度。当Na2S2O3反应完全，反应（1）生成的微量I3-立即与淀粉发生作用，使溶液呈现蓝色，并随I3-离子的增多溶液蓝色逐渐加深。其一，原实验曾采用KIO3与Na HSO3实验体系，因KIO3试剂的成本日益高涨转而以（NH4)2S2O8与KI替代。

k为该反应的反应速率常数。在水溶液中，K2S2O8与KI发生的反应和（NH4)2S2O8与KI发生的反应相似，此处不再赘述

相关链接：化学反应，氧化剂，溶液。当Na2S2O3反应完全，反应（1）生成的微量I3-立即与淀粉发生作用，使溶液呈现蓝色，并随I3-离子的增多溶液蓝色逐渐加深。

由两个反应式的计量关系可以看出，Fe Cl3与Na2S2O3为1∶1的计量关系，即：当溶液呈现蓝色时S2O32-已全部耗尽，所以c(S2O32-）即S2O32-的起始浓度。同时，在化学反应速率实验中试剂用量较大，产生含碘废液多，不符合实验室绿色化要求，需要对实验体系作进一步改进并力求减少试剂用量。